Technique de fluorescence-anticorps pour la détection d'une bactérie particulière dans un échantillon

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Viser à apprendre le principe de la technique d'immunofluorescence ou d'anticorps de fluorescence pour la détection de bactéries particulières dans un échantillon.

La technique de la fluorescence-anticorps ou immunofluorescence est une procédure rapide et fiable pour la détection de bactéries particulières dans un échantillon. Un certain nombre d'anticorps, marqués avec des colorants fluorescents, tels que l'isocyanate ou l'isothiocyanate de fluorescéine, chacun spécifique à une bactérie particulière sont disponibles.

L'un de ces anticorps marqués, spécifique à la bactérie particulière à détecter, est ajouté en gouttes à un frottis fixé à la chaleur de l'échantillon de bactérie inconnue sur une lame et réparti doucement sur la surface du frottis. Un papier filtre humidifié est placé à l'intérieur d'une boîte de Pétri.

Ensuite, la lame est placée à l'intérieur sur une tige de verre en forme de U et incubée à 25 ° C pendant 35 minutes. L'excès d'anticorps sur le frottis est éliminé avec une solution saline tamponnée au phosphate à 1%. La lame est immergée dans un récipient Coplin contenant une solution saline tamponnée au phosphate à 1% à 25 ° C pendant 10 minutes. La lame est séchée sur du papier absorbant. Une goutte de glycérol est ajoutée au frottis. Il est recouvert d'une lamelle et examiné au microscope à fluorescence.

Si la bactérie spécifique à l'anticorps marqué utilisé est présente dans l'échantillon inconnu de la bactérie, un complexe antigène-anticorps est formé (dans ce cas, la bactérie est l'antigène). Lorsque l'anticorps est marqué avec une substance fluorescente, le complexe antigène-anticorps émet une fluorescence lorsqu'il est observé au microscope à fluorescence. Si les bactéries spécifiques à l'anticorps sont absentes, l'anticorps fluorescent est éliminé par lavage et la fluorescence n'est pas observée.